各位访客大家好!今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于eb染料染色dna的问题,于是小编就整理了几个相关介绍的解答,让我们一起看看吧,希望对你有帮助
DNA凝胶电泳实验中EB的作用?EB即溴化乙锭,DNA诱变剂,作用机理是什么...
溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。2溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配。许多人认为溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性。
在制备琼脂糖胶时,需要加入EB,EB可以与DNA结合,在紫外灯下显示DNA位置,也就是你说的白色条带。
实验室常用的核酸染色剂是溴化乙锭(EB)。染色效果好,操作方便,但是稳定性差,具有毒性。注意观察凝胶时应根据染料不同使用合适的光源和激发波长,如果激发波长不对,条带则不易观察,出现条带模糊的现象。
在搜搜上找的同一问题的答案:“染色啊。你agarose胶电泳跑DNA,根据大小不同电泳速度不同,可是最后你需要看啊,怎么看呢?可见光下看不见DNA的。
核酸电泳中以前常用的染色剂是溴化乙锭(ethidium bromide EB)。BE见光分解,应在避光条件下4℃保存。溴化乙锭是一种扁平分子,可以嵌入核酸双链的配对碱基之间。在紫外线照射BE-DNA复合物时,出现不同的效应。
急!为何EB染色液电泳的DNA区带在紫外灯下有的暗有的亮?是什么原理影响...
带不亮表明你上样中DNA浓度过低。可能是扩增效果不好或DNA提取不好或者是稀释的过多。如果marker都不亮的话说明你染色不好。你把EB的量加多一些。
,你的DNA样品不纯,含蛋白质等杂质(如果你是自己提出来的DNA就更有可能是这个原因)。但是你的marker居然也这样。那么可能是第二个原因。
在制备琼脂糖胶时,需要加入EB,EB可以与DNA结合,在紫外灯下显示DNA位置,也就是你说的白色条带。
这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近,导致与DNA结合的染料呈现荧光,其荧光产率比游离溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料,而被结合的染料本身吸收302nm和366nm的光辐射。
k等指DNA程度,100bp,200bp,500bp,1 kbp,等 亮度指DNA的多少,越亮表示dna越多 电泳图得到与500有相同普带,指你的目标泳道中有500bp长的DNA,即与marker中的500bp DNA 跑的速度一样。处以同一水平位置。
EB先染色DNA,再电泳,可行么
1、在凝胶或电泳缓冲液中加入终浓度为0.5μg/ml的EB,染色可在电泳过程中进行,能随时观察核酸的迁移情况。
2、染色啊。你agarose胶电泳跑DNA,根据大小不同电泳速度不同,可是最后你需要看啊,怎么看呢?可见光下看不见DNA的。
3、尽管在该染料存在的情况下,线状DNA的电泳迁移率约降低15%,因此,当需要知道DNA片段的准确大小(如DNA限制酶酶切图谱的鉴定),凝胶应该在无EB情况下电泳,电泳结束后用EB染色。染色完毕后,通常不需要脱色。
4、有资料说60-70摄氏度会挥发,所以若要把EB配在胶里要等到冷却到60度以下再加EB(也有不配在胶里,跑完后再到EB溶液里染色)。有资料说见光分解。但这两点我都没有见到原始的或权威的材料,所以不敢肯定。
荧光染料EB染色的优缺点
最终激发EB发射出波长为590nm的可见光谱红橙区的红色荧光,发射波长为605nm.EB染色的缺点及注意事项 切勿吸入粉尘。不慎与眼睛接触后,请立即用大量清水冲洗并征求医生意见。穿戴适当的防护服、手套和护目镜或面具。
优点是:(1)灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大,蛋白质-染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。
由于各种染色方法灵敏度的不同并且不同类型的蛋白质对不同的染色方法有特异性,所以各种染色方法都有优缺点。
EB染料 EB属于核酸分子嵌入剂,通常用于分子遗传学、DNA和染色质结构分析等研究中,特别是国内很多实验室仍在使用EB进行凝胶核酸电泳实验的染色。
小伙伴们,上文介绍eb染料染色dna的内容,你了解清楚吗?希望对你有所帮助,任何问题可以给我留言,让我们下期再见吧。