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分析等电点如何影响染料
细菌的等电点较低,pH值大约在2—5之间,故在中性、碱性或弱酸性溶液中,菌体蛋白质电离后带阴电荷;而碱性染料电离时染料离子带阳电。因此,带阴电的细菌常和带阳电的碱性染料进行结合。
![影响染色结果的关键步骤-影响染料染色的因素-图1 影响染色结果的关键步骤-影响染料染色的因素-图1](https://www.jndy-bz.com/zb_users/upload/2023/11/20231119000028170032322862363.jpeg)
紫外分光光度法。蛋白质分子中存在含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸,使蛋白质对280nm的光波具有最大吸收值,在一定的范围内,蛋白质溶液的吸光值与其浓度成正比,可作定量测定。
, 一般的碱性染料,也就是含有胺基的盐类,其阴离子为酸根离子,电离后带正电荷,中性盐会起缓染的作用,防止染色不均匀产生色斑色条。
根据染料的类别选用不同的酸,如强酸浴染色用硫酸,弱酸浴染色用醋酸,中性浴染色可采用醋酸铵或硫酸铵。电解质的加入。羊毛染色时加电解质的作用与染浴pH值有关。
酸性染料染蛋白质纤维,ph小于等电点时,中性电解质起促染作用:酸性染料染蛋白质纤维时,当pH值小于等电点时,中性电解质可以降低溶液的pH值,使其保持在最适合染色的pH值。
![影响染色结果的关键步骤-影响染料染色的因素-图2 影响染色结果的关键步骤-影响染料染色的因素-图2](https://www.jndy-bz.com/zb_users/upload/2023/11/20231119000028170032322857836.jpeg)
细菌的等电点较低,pH值大约在2—5之间,故在中性、碱性或弱酸性溶液中,菌体蛋白质电离后带阴电荷;而碱性染料电离时染料离子带阳电。因此,带阴电的细菌常和带阳电的碱性染料进行结合。所以,在细菌学上常用碱性染料进行染色。
考马斯亮蓝染色失败原因
1、溶液pH值不合适:考马斯亮蓝染色剂对pH值非常敏感,最适合的pH范围是3-4。如果蛋白质溶液的pH值过高或过低,也会影响染色效果。染色剂过期或污染:如果考马斯亮蓝染色剂过期或受到污染,也会影响染色效果。
2、染色时间过长:如果染色时间过长,染料会渗透到蛋白质内部的纤维中,导致染色效果更加牢固,难以脱色。 染料浓度过高:如果染料浓度过高,染料分子会与蛋白质分子形成更强的结合力,使得染色效果更加牢固,难以脱色。
3、可能会是水的问题。做蛋白质标准曲线,考马斯亮蓝配出来一直都是蓝色,最开始还是发紫色的样子。就想是不是蒸馏水有问题,换成了娃哈哈纯净水,然后就是很正的蓝色。
![影响染色结果的关键步骤-影响染料染色的因素-图3 影响染色结果的关键步骤-影响染料染色的因素-图3](https://www.jndy-bz.com/zb_users/upload/2023/11/20231119000028170032322888227.png)
4、如果marker跑在胶上的话说明胶是没问题的,要么是你样品蛋白含量太低,可以将样品浓缩一下,也可以加大上样量;或者可能你配的胶的浓度有问题,这样样品可能跑不开,建议根据蛋白的分子量按照分子克隆选用分离胶浓度。
5、以减少这方面的偏差。 标准曲线也有轻微的非线性,因而不能用Beer定律进行计算,而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度。以上就是考马斯亮蓝法的干扰因素,如果在使用过程中遇到问题,可以咨询生物领域的专业人士。
用酸性染料染色造成缺陷的原因有哪些?如何解决?
组织切片被过度染色:在HE染色中,伊红是一种强酸性染料,如果组织切片被过度染色,就可能导致切片在脱水无水乙醇后逐渐变黑。这可能是由于染料浓度过高、染色时间过长、切片厚度过大等原因造成的。
正常情况,酸性染料染羊毛还行,染丝绸的牢度本身不是太好。大红、黑色等颜色更加不好。
改变染色工艺,如液比、温度、pH、时间、机械作用等工艺条件,注意鞣剂、复鞣剂、填料、加脂剂以及染色助剂的影响。
优点:酸性染料比色法可以用于各种类型的生物碱测定,包括单一生物碱和多种生物碱的混合物。缺点:酸性染料比色法不能区分不同种类的生物碱,对于不同种类的生物碱可能会出现交叉反应,造成误差。
解决办法 (1) 加强坯布检测,有差异的选择作浅色、本白或增白色。(2) 挑选覆盖性、匀染性好的染料。分散染料的覆盖性、匀染性优于酸性染料,可选择加入部分分散染料。
最近,对棉/尼龙混纺织物的染色有所增加,在使用活性染料对棉组分染色时,活性染料对尼龙组分的沾污比较严重,同时也会造成染色牢度下降与染色再现性不佳。
微生物染色的微生物染色的基本原理
霉菌的制片和简单染色的基本原理是: 制片:将霉菌培养在培养基上,待其生长到一定程度后,取少量菌落,涂抹在玻璃片上制成制片。
原理:使组织细胞的某一部分染上与其他部分不同的颜色或深度不同的颜色,产生不同的折射率,以便观察。
单染色法 基本原理. 编辑. 所谓单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。. 此法操作简便,适用于菌体一般形态的观察。. 在中性、碱性或弱酸性溶液中,细菌细胞通常带负电荷,所以常用碱性染料进行染色。
细菌用革兰氏染色就可以了(某些特殊的细菌可以用其他染色法)先用接种环在酒精灯上灼烧灭菌,然后伸入液体培养基中降温,并挑取一环在玻片上待其自然干燥。如果含菌量太大,可以用生理盐水稀释。
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物,其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍。美蓝是一种无毒性的染料,它的氧化型呈蓝色,还原型无色。
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